Сайт для врачей и фармацевтов
Карта сайта Сделать стартовой Добавить в избранное
Loading
Медицинский информационный портал
Системы удаленного осмотра: как сэкономить на обязательных медосмотрах?

Удаленный осмотр — это процедура, позволяющая определить готовность сотрудника к выходу на рейс/смену без личного присутствия медицинского специалиста. Она реализуется с помо..


Что такое тонометр на запястье и кому он показан

Чем полезен тонометр на запястье? Артериальное давление – жизненный показатель, который крайне важно контролировать. Данная величина показывает, какую силу кровь, выталкиваем..


Прием антипсихотиков повышает риск смерти у несовершеннолетних

Исследователи разбили пациентов на три группы – дети и взрослые, получавшие терапию антидепрессантами и психостимуляторами; дети и юные взрослые, получавшие терапию пониженны..


Медики раскрыли, как диагностировать рак почек

Это позволяет сделать стандартный анализ крови, заключили авторы проекта...


Нормы здорового артериального давления изменились

Заявление о новом нормативе в отношении показателей артериального давления прозвучало на ежегодной кардиологической конференции в Мюнхене, а сами нормы опубликовал на своих страниц..


Кабмін підтримав скасування дозволів на цілительство

Проект закону ініціювало Міністерство охорони здоров'я на початку січня 2018 року..


Ученые предлагают учитывать поведение людей в анализе распространения эпидемий

Ученые из Университета Ватерлоо предлагают использовать математические модели для анализа распространения инфекционных заболеваний. Об этом пишет «EurekAl..


Диагностика хеликобактериоза диагностика хеликобактериоза хеликобактериоз H. pylori рак желудка методы диагностики биопсия эндоскопия возбудитель микробиология цепная полимеразная реакция иммуноблоттинг тест антитела возбудитель специфический антиген специфичность чувствительность тест-система ELISA антигены пероксидаза слюна жидкость дыхательный тест уреазный тест антиген HpSA

Диагностика хеликобактериоза



О.Ю.Смирнов
Сумской государственный университет



Бактерия Helicobacter pylori рассматривается как один из основных этиологических факторов язвенной болезни и канцероген первой группы [1]. Поэтому ее выявление имеет чрезвычайное диагностическое значение. По оценкам Всемирной организации здравоохранения, излечение от H. pylori уменьшит количество случаев рака желудка на 60-80%, не говоря уже об экономии огромных средств на терапию [2].

Существует три основные группы методов диагностики хеликобактериоза [3, 4].

1. Методы, основанные на анализе образцов, полученных с помощью биопсии в процессе эндоскопии (при этом тем или иным способом обнаруживается непосредственно сам возбудитель). Сюда относятся и культивирование - типичный метод классической микробиологии, и анализ биоптатов на уреазную активность, и гистологическое исследование, и исследование взятого материала методами ДНК-анализа (цепной полимеразной реакции - ЦПР) или иммуноблоттинга. Их общие недостатки: а) инвазивность (биопсия); б) взятый образец может не отражать состояние всей стенки желудка (разные образцы от одного пациента дают различные результаты), т.е. не будет репрезентативным.
Удобство метода состоит в определении сразу нескольких параметров. Например, фирмы Oxoid и Creatogen предлагают быстрый (в течение 3 часов) тест для одновременной идентификации H.pylori и определения ее устойчивости к антибиотику кларитромицину (образец берется путем биопсии желудка) [5].

Иммунологические методы, позволяющие обнаружить антитела против возбудителя. Недостаток в том, что методы не позволяют отличать текущую инфекцию от прошедшей. Но благодаря своей простоте они находят широкое применение. Специфичность этих методов зависит от качества используемого антигена и качества цветоразрешения. Реакции выполняются в планшетах для иммунологических реакций.
Наличие в сыворотке специфических антител против H. pylori имеет диагностическое значение. Присутствие антител в концентрации свыше 28 Ед/мл характерно для язвы желудка и двенадцатиперстной кишки во всех возрастных группах, причем у лиц старше 50 лет концентрация уже свыше 9 Ед/мл свидетельствует о наличии язвы. Вне зависимости от возраста концентрация менее 9 Ед/мл не может указывать на наличие язв. Тест-наборы для определения в сыворотке IgG-, IgM- и IgA-антител выпускают многие фирмы: Cambridge Life Science (Великобритания), DIESSE (Италия), INOVA Diagnostics, Biomerica и Teco Diagnostics (США), Orion Diagnostica (Финляндия) и другие [6-8]. Тестирование занимает от нескольких минут до полутора часов. Компания Meridian Bioscience (США) в 2002 г. разработала новый тест на H.pylori: иммунологическое определение специфического антигена бактерии (HpSA) проводится в течение 5 минут, что позволяет быстро диагностировать возбудителя и контролировать лечение [9]. Сыворотка движется по поглощающей жидкость бумажной полоске, и если в ней имеются антитела, то они связываются с нанесенной на бумагу полоской антигена, к которому присоединен краситель. Образовался комплекс антитело-антиген-краситель - появилась цветная полоса.

Диагностика хеликобактериоза


В тест-системе компании Fisher Scientific (Сингапур) [10] все классы антител к H.pylori определяются так: краситель (коллоидное золото) с помощью особых иммунологических реакций присоединяется к человеческим иммуноглобулинам, находящимся в исследуемом образце, и если там присутствуют какие-либо антитела к возбудителю, этот сложный комплекс в процессе хроматографии присоединяется к антигену H.pylori, прикрепленному к твердому носителю (подложке). В результате появляется розово-красная линия. Контрольный (положительный) образец позволяет проверить правильность выполнения теста. Чувствительность метода составляет 90%, а специфичность - 96%.

Фирма Saliva Diagnostic Systems (Великобритания) [11] выпускает тест-систему, анализирующую всего 3 мкл крови, взятой из пальца. Капиллярным наконечником пробирки, содержащей тест-полоску, прикасаются к капле крови, затем погружают его в колпачок с буферным раствором. В течение 15 мин. происходит иммунохроматография. При наличии антител к H.pylori появляется красная полоска. Метод имеет 100% специфичность и 98% чувствительность. Совпадение с данными биопсии - 99%. Ряд тест-систем (итальянской фирмы Radim SpA, американской Biomerica, германской R-Biopharm, бельгийской Gamma) позволяет обнаружить IgG-антитела к факторам вирулентности - белкам CagA и VacA [12-15]. Белок CagA обнаруживается у 100% больных с пептическим раком и только у 60% с гастритом.

Некоторые фирмы используют технологию ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay - твердофазный иммуноферментный анализ), основанную на взаимодействии меченных биотином антигенов (инактивированные природные антигены иммобилизованы на твердую подложку) и стрептавидина, связанного с пероксидазой; результаты готовы через 1,5 ч. Чувствительность метода 96%, специфичность 86-93% [7, 13, 16-17].
Обычно концентрация IgG в слюне - менее 1% от уровня антител в сыворотке, поэтому, в принципе, достаточно чувствительный тест может использоваться для выявления антител в слюне (т.е. избегая инвазивных процедур). Фирма Ani Biotech Oy (Финляндия) разработала быстрый метод обнаружения антител в слюне [18]. Одностадийная иммунохроматографическая процедура может выполняться дома самим пациентом: слюна отбирается палочкой с ватным тампоном (условие - не пить за 2 часа до взятия пробы, чтобы не изменился состав слюны), тампон переносится в специальную пробирку, и слюна диффундирует в реакционную жидкость, содержащую буфер для компенсации отклонений в pH слюны. По изменению цвета делается соответствующий вывод. Специфичность метода 95%, чувствительность 98,2%, точность 96,3%.

Диагностика хеликобактериоза


3. Дыхательный тест, он же уреазный тест, он же метод "мочевина + дыхание" (urea breath test, UBT) - весьма чувствительный, определяет наличие возбудителя именно в данный момент, и потому наиболее подходит для мониторинговой терапии [19, 20]. Он основан на определении уреазной активности. Больной проглатывает 13C-меченую мочевину (H2N13CONH2), которая усваивается бактерией благодаря ферменту уреазе. Образовавшийся меченый углекислый газ поступает в кровь и затем выделяется при дыхании. Если отбирать каждые 10 мин. пробы выдыхаемого воздуха и оценивать соотношение 13CO2/12CO2, можно обнаружить, что рост кривой начинается через 10 мин., пик 13CO2 достигается через 30 мин., а падение происходит через 60. В анализируемой пробе воздуха молекулы CO2 автоматически отделяются от N2 и O2, затем ионизируются и ускоряются, поступая в анализатор. В магнитном поле траектории молекул с разным молекулярным весом различаются, позволяя провести анализ соотношения изотопов. Десять мл воздуха отбираются перед приемом мочевины, затем 10 мл спустя 30 мин., и обе пробы анализируются. По разным данным, специфичность метода 98-98,5%, чувствительность 97,9-100%, что сравнимо с традиционными инвазивными методами эндоскопии.

Недостаток метода состоит в том, что требуется наличие соответствующего прибора - масс-спектрометра, определяющего соотношение изотопов [21, 22]. Цена этих приборов такова, что они имеются главным образом в центральных учреждениях, а, следовательно, образцы для анализа нужно транспортировать, пациент же должен ждать результата. Преимущество - в том, что масс-спектрометры позволяют одновременно анализировать 160-200 проб, причем результаты выдаются через 1-2 мин.

Вообще методы анализа выдыхаемого воздуха позволяют обнаружить усиленный рост бактерий, опорожнение желудка, толерантность к глюкозе (ее переносимость), непереносимость лактозы, дисфункции печени и нарушения деятельности поджелудочной железы.

Наконец, недавно появился новый (4-й) оригинальный метод диагностики: итальянская фирма Meridian Diagnostics [9] и английская Intersep [23] разработали тест-систему для иммунологического обнаружения антигенов HpSA Helicobacter pylori в свежих или замороженных образцах кала в одну стадию. Метод позволяет подтвердить наличие инфекции и не дает ложноположительных результатов, встречающихся при анализе сыворотки пациентов, которые имели заболевание в прошлом. Метод хорошо коррелирует с UBT и инвазивными методами. Результат готов через 75 мин. Этим методом недавно был выявлен старейший диагностированный случай хеликобактериоза. Д-р Pelayo Correa с помощью теста на основе платины обнаружил фекальные антигены Helicobacter pylori в доколумбовых мумиях 1700-летнего возраста, получив доказательство самого древнего случая заражения человека этим микробом. Использованный им метод обнаруживает антигены возбудителя язвенной болезни в свежем или замороженном кале менее чем за 90 минут. Показатели чувствительности и специфичности метода - по 96% (для сравнения: у метода UBT - 90-96% и 90-98%, у биопсии - 80-98% и 95-100% соответственно).

Литература
1. International Agency for Cancer Research. Shistosomes, liver flukes and Helicobacter pylori. IARC Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans. IARC: Lyon, 1994:61
2. The role of diagnostic tests in reducing healthcare costs // Clinical Laboratory International, 8 (2001).
3. Urea for breath testing for the detection of Helicobacter pylori // Clin. Lab. Int., 4 (1998).
4. The link between H.pylori and gastric cancer // Clin. Lab. Int., 3 (2000).
5. Rapid and reliable test for the simultaneous identification of H.pylori and its sensitivity towards macrolids // Clin. Lab. Int., 3 (2000).
6. Antibodies to H.pylori detected by rapid, one-step test // Clin. Lab. Int., 1 (1998).
7. ELISA for H.pylori Abs measure the three main isotypes // Clin. Lab. Int., 4 (1997).
8. H.pylori ELISA for serum or plasma // Clin. Lab. Int., 3 (2000).
9. www.meridianbioscience.com
10. Rapid test for H.pylori detects all classes of antibodies to H.pylori // Clin. Lab. Int., 6 (1999).
11. Test for antibodies to H.pylori suitable for the use at point of care // Clin. Lab. Int., 1 (1998).
12. Cytotoxin associated gene A (CagA) ELISA allows identification of H.pylori patients at higher risk of carcinoma // Clin. Lab. Int., 5 (1999).
13. Western blot for H.pylori // Clin. Lab. Int., 4 (1997).
14. IgG antibodies to H.pylori CagA antigen quantitated through use of a highly specific automated ELISA test // Clin. Lab. Int., 7 (1997).
15. Rapid test for Abs to H.pylori uses HSP60 and CagA recombinant antigens // Clin. Lab. Int., 7 (1999).
16. Quantitative ELISA test for H.pylori IgG antibodies // Clin. Lab. Int., 1 (1998).
17. ELISA for IgG to H.pylori // Clin. Lab. Int., 7 (1998).
18. H.pylori antibodies in saliva determined by rapid test // Clin. Lab. Int., 1 (1999).
19. 13C-Urea breath test for the detection of H.pylori approved by European authorities // Clin. Lab. Int., 1 (1998).
20. Analyser of 13C in breath for detection of gastric bacterial infection // Clin. Lab. Int., 1 (1998).
21. Fully automated 13C UBT mass spectrometer for the diagnosis of Helicobacter pylori infection // Clin. Lab. Int., 1 (1998).
22. Compact isotope ratio mass spectrometer designed specially for urea breath test of Helicobacter pylori // Clin. Lab. Int., 1 (1999).
23. H.pylori immunoassay for stool samples // Clin. Lab. Int., 3 (2000).
24. The oldest diagnosed case of H.pylori and the definitive new test that detected it HpSA // Clin. Lab. Int., 7 (1998).

Medicus Amicus 2003, #1


Оценка статьи: 5
  плохо234  5 хорошо


 Новости

« Март ´24 »
ПВСЧПСВ
    123
45678910
11121314151617
18192021222324
25262728293031
08


Партнеры




Vox populi - vox dei

Хотите ли Вы принимать участие в коротких интернет-опросах на медицинскую тематику?

Да
Нет


Результаты предыдущих голосований

Всегда ли вы находите ответы на ваши вопросы в Medicus Amicus?

 Да - 184 [75%]

 Нет - 60 [24%]


Всего голосов: 245



Medicus Amicus - это медицинский сайт, фотосайт, психологический сайт,
сайт постоянного медицинского образования, медицинская газета и даже медицинский журнал.
Все замечания и пожелания присылайте используя форму обратной связи
Все права защищены и охраняются законом.
© 2002 - 2024 Rights Management
Автоматизированное извлечение информации сайта запрещено.
Подробности об использовании информации, представленной на сайте
в разделе "Правила использования информации"